Anforderungen für die Registrierung von Sporiziden​​​​​​​

Sporizide werden auf harten, nicht porösen, leblosen Oberflächen und Gegenständen zur Abtötung von Sporen eingesetzt. Bakterielle Sporen gelten als besonders schwierig zu zerstörende Form mikrobiellen Lebens.

Die US-amerikanische Umweltschutzbehörde (EPA) verlangt die Erstellung von Wirksamkeitsdaten unter kontrollierten Testbedingungen, um antimikrobielle Produkte als sporizid bezeichnen zu können. Um Daten über die sporizide Wirksamkeit zu erfassen, sollte die offizielle AOAC-Methode 966.04 zu sporizider Aktivität von Desinfektionsmitteln befolgt werden. Der Anspruch einer sporiziden Wirkung auf harten, nicht porösen Oberflächen eines flüssigen Produkts erfordert, dass 60 Träger aus Edelstahl-Penizylindern, die mit Sporen von Bacillus subtilis (ATCC 19659) und Clostridium sporogenes (ATCC 3584) inokuliert wurden, dem Sporizid ausgesetzt werden. Es sollten drei Chargen des Produkts im LCL der im CSF für das Produkt aufgeführten A.I.(s) getestet werden. Zusätzlich zu dieser Anforderung muss das Sporizid in einem Verifizierungstest fehlendes Wachstum (vollständige Abtötung) auf 60 Trägern (30 Träger pro Organismus für eine Charge) nachweisen. Die Verifizierungstests müssen in einem separaten Labor oder durch andere Mitarbeiter durchgeführt werden.

In Europa führen die Hersteller Suspensionstests nach der Methode EN13704 durch, um eine sporizide Wirkung nachzuweisen. Um eine sporizide Wirkung nachzuweisen, muss eine >3-log-Reduktion von Bacillus subtilis (ATCC 6633) bei einer Einwirkzeit von 60 Minuten oder weniger erreicht werden.

Die aktuelle Version von EN13704 wurde 2018 mit einer Reihe von Änderungen im Vergleich zur vorherigen Version aus dem Jahr 2002 veröffentlicht. Diese umfasst Änderungen bei der Sporenpräparation und der Empfindlichkeitsprüfung von Testorganismen. 

Bei der Präparation von Sporen müssen im Rahmen von EN13704 80 % der vegetativen Zellen sporenbildend sein, bei AOAC 966.04 müssen 95 % der vegetativen Zellen sporenbildend sein.  Nach der Vorbereitung der Sporensuspension erfordert EN13704 einen Anfälligkeitstest, um die Leistung der Sporensuspension gegenüber zwei Standardbioziden, Glutaraldehyd und Peressigsäure, zu prüfen. Bei diesen Tests werden zwei Stärken mit jeweils hoher und niedriger Konzentration pro Biozid verwendet. Um die Akzeptanzkriterien von EN13704 zu erfüllen, muss die Sporensuspension bei der niedrigen Konzentration eine Überlebensrate (<3-log-Reduktion) und bei der hohen Konzentration eine Abtötung (>3-log-Reduktion) aufweisen. AOAC 966.04 erfordert einen Salzsäure-Resistenztest, um die Leistung der Sporensuspension mit einem 2.5 M HCl-Standard zu vergleichen. Um die Akzeptanzkriterien von AOAC 966.04 zu erfüllen, müssen die Sporen 2.5 M HCl mindestens 2 Minuten lang widerstehen.

Die Verwendung von Sporensuspensionen im AOAC-Test auf Sporizide und die sorgfältige Vorbereitung und Verwendung von Sporensuspensionen in EN13704 gewährleisten, dass Produkte mit angeblich sporiziden Eigenschaften die entsprechenden Herausforderungen bei der Wirksamkeitsprüfung erfüllen.

Sporizide Wirksamkeit quaternäre Ammoniumverbindungen

Quaternäre Ammoniumverbindungen (QACs) sind kationische Tenside und bieten ein breites Wirkungsspektrum gegen Mikroorganismen. Sie sind jedoch im Allgemeinen gegen grampositive Bakterien in niedrigeren Konzentrationen wirksamer sind als gegen gramnegative Bakterien. Sie haben eine erheblich niedrigere Wirksamkeit gegen Sporenbildner³. 

Viele Biozide sind bei niedrigen Konzentrationen bakterizid oder bakteriostatisch für nicht sporulierende Bakterien, einschließlich der vegetativen Zellen von Bacillus- und Clostridium-Arten. Einige Biozide können in hohen Konzentrationen eine sporizide Wirkung erzielen (z. B. bei Glutaraldehyd und CRA). 

Im Gegensatz dazu haben selbst hohe Konzentrationen von Alkohol, Phenolen, QACs und Chlorhexidin keine sporizide Wirkung (im Fall von Chlorhexidin ist jedoch eine sporizide Wirkung möglich, wenn es bei höheren Temperaturen verwendet wird)⁴. 

QACs sind sporostatisch und hemmen das Auswachsen von Sporen (die Entwicklung einer vegetativen Zelle aus einer gekeimten Spore), aber nicht die eigentlichen Keimungsprozesse (die Entwicklung von der Keimruhe zu einem metabolisch aktiven Zustand)².

QACs bieten wahrscheinlich eine gewisse Wirksamkeit gegen vegetative Zellen von Bacillus- und Clostridium-Arten, können die Spore jedoch nicht selbst zerstören.

Ein Nachweis der sporiziden Wirkung setzt voraus, dass die Tests gegen Sporen und nicht gegen vegetative Zellen durchgeführt werden. Um die Kontrolle im Reinraum zu gewährleisten, sollten Biozidwirkstoffe mit sporizider Wirkung gegen die Sporen selbst eingesetzt werden.

[1] McDonnell, G, Russell AD. Antiseptic and Disinfectant: Activity, Action and Resistance. Clin Micrbiol. Januar 1999; 12(1):147-179.
[2] Russell AD. Bacterial spores and chemical sporicidal agents. Clin Microbiol Rev. April 1990; 3(2):99-119.
[3] Sandle, T. The CDC Handbook: A Guide to Cleaning & Disinfecting Cleanrooms. 1–27.
[4] Shaker L A, Russell A D, Furr J R. Aspects of the action of chlorhexidine on bacterial spores. Int J Pharm. 1986;34:51-56.